文章標(biāo)題:
Development of an Innovative 3D Cell Culture System to Study Tumour - Stroma Interactions in Non-Small Cell Lung Cancer Cells
采用創(chuàng)新的三維細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng),研究非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞的相互作用
介紹:使用新穎的三維(3D)共培養(yǎng)模型----Insphero AG研發(fā)的GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)(GravityPLUS 3D cell culture platform), 研究非小細(xì)胞肺癌(NSCLC) 細(xì)胞系和肺成纖維細(xì)胞的共培養(yǎng)。使用GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)可以研究腫瘤-間質(zhì)間的相互作用,是更接近于體內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng)模型。
方法:使用多孔懸滴微量培養(yǎng)板(GravityPLUS 3D cell culture platform),研究單細(xì)胞的3D培養(yǎng)和多細(xì)胞的3D共培養(yǎng)。在懸滴培養(yǎng)板中,研究NSCLC細(xì)胞系之 A549細(xì)胞的單獨(dú)培養(yǎng)、NSCLC細(xì)胞系之 Colo699細(xì)胞的單獨(dú)培養(yǎng)、A549與肺成纖維細(xì)胞的共培養(yǎng)、和Colo699與肺成纖維細(xì)胞的共培養(yǎng)。腫瘤微球體形成并穩(wěn)定后(培養(yǎng)5天和10天后),使用Annexin V/Propidium Iodide(膜聯(lián)蛋白V/碘化丙啶)對(duì)微球體染色并用流式觀測;腫瘤成纖維細(xì)胞微球體形成后用電鏡(SEM)、熒光顯微鏡、半薄切片和免疫組化(IHC)觀測;除了這些常規(guī)組織學(xué)檢測,還用免疫組化的方法檢測鈣粘素、波形蛋白、腫瘤增殖抗原Ki67、纖連蛋白、角蛋白7和平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)的表達(dá)量。
結(jié)果:A549單細(xì)胞微球體與A549與成纖維細(xì)胞培養(yǎng)共培養(yǎng)的微球體相比,生存能力要差一些;而Colo699微球體的生存能力要比Colo699共培養(yǎng)的強(qiáng)。 ki67的表達(dá)量在單細(xì)胞培養(yǎng)和共培養(yǎng)也存在很大的差異。波形蛋白表達(dá)量的增加和鈣粘素表達(dá)量的減少都能被監(jiān)測到,表明三維培養(yǎng)過程中存在間質(zhì)表型的轉(zhuǎn)變。除此之外,只有成纖維細(xì)胞系與A549細(xì)胞系共培養(yǎng)的時(shí)候,才有表達(dá)a-SMA,從而表明一種間質(zhì)狀態(tài)向另一種間質(zhì)狀態(tài)轉(zhuǎn)換。
結(jié)論:證明GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)(GravityPLUS 3D cell culture platform)是研究腫瘤微球體共培養(yǎng)的很有利的工具。而且,這些微球體可以進(jìn)一步探討腫瘤與間充質(zhì)間的相互作用,可以更好的反映出腫瘤細(xì)胞在體內(nèi)微環(huán)境的狀態(tài)。Insphero開發(fā)的GravityPLUS 3D懸滴培養(yǎng)系統(tǒng)將會(huì)為研發(fā)抗癌劑及尋找生物標(biāo)記物做出一些貢獻(xiàn)。
Insphero 3D懸滴培養(yǎng)板產(chǎn)品介紹:http://www.mmcare.cn/qxky001-Brand-24075/
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